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Antibiótico con Agar: Preparación y Uso en Medios de Cultivo

La gentamicina es un antibiótico soluble en agua originalmente purificado del hongo Micromonospora purpurea. Actúa uniéndose a la subunidad 30S del ribosoma bacteriano, lo que provoca la inhibición de la síntesis de proteínas y la muerte de las bacterias susceptibles. Gibco® Gentamicin es eficaz contra una amplia variedad de bacterias grampositivas y gramnegativas, y se utiliza para prevenir la contaminación de cultivos celulares por bacterias. La concentración de trabajo recomendada oscila entre 0,5 y 50 µg/ml.

La Gentamicina es el único antibiótico que resiste el proceso de esterilización, es por eso que para el cultivo de hongos es la mejor opción.

Receta de Agar Dextrosa Sabouraud (SDA)

El Agar dextrosa Sabouraud (SDA) se utiliza para el aislamiento, cultivo y mantenimiento de especies de hongos y levaduras no patógenas y patógenas.

Sabouraud Dextrose Agar (SDA) fue formulado por Sabouraud en 1892 para el cultivo de dermatofitos.

  • Dextrosa (glucosa): 40 gramos
  • Peptona: 10 gramos
  • Agar: 15 gramos
  • Agua destilada: 1000 ml

El pH final es de 5,6 +/- 0,2 a 25ºC.

Variantes de Agar Dextrosa Sabouraud (SDA)

Existen varias variantes del Agar Dextrosa Sabouraud (SDA) que contienen diferentes antibióticos y tienen diferentes niveles de pH. Algunas de estas variantes incluyen:

  • Agar dextrosa Sabouraud con cloranfenicol
  • Agar dextrosa Sabouraud con cloranfenicol y gentamicina
  • Agar dextrosa Sabouraud con cloranfenicol y tetraciclina
  • Sabouraud Dextrose Agar, Emmons

Estos medios pueden contener cloranfenicol, tetraciclina y gentamicina como antimicrobianos para inhibir el crecimiento de bacterias grampositivas y gramnegativas. La adición de gentamicina también ayuda a inhibir el crecimiento de bacterias gramnegativas.

La modificación de Emmons con pH neutro parece favorecer el crecimiento de algunos hongos patógenos, como los dermatofitos.

Preparación de SDA

Para preparar el SDA, siga estos pasos:

  1. Combine todos los ingredientes en ~ 900 ml de agua desionizada.
  2. Ajustar a pH 5,6 con ácido clorhídrico y ajustar el volumen final a 1 litro.
  3. Caliente a ebullición para disolver el medio por completo.
  4. Autoclave a 121ºC durante 15 minutos.
  5. Enfriar a ~ 45 a 50 ° C y verter en placas de Petri o tubos inclinados.

Morfología de colonias en SDA:

El agar dextrosa Sabouraud sin inocular tendrá un aspecto de polvo suelto de color pajizo en su forma deshidratada y un gel de color pajizo claro a pajizo en su forma preparada. Los controles positivos como Candida albicans ATCC® 10231 mostrarán un buen crecimiento con colonias de color crema, mientras que Aspergillus brasiliensis ATCC® 16404 mostrará micelio blanco y esporas negras. El control negativo, sin inocular, no mostrará ningún cambio.

Limitaciones de SDA:

  • Algunas cepas pueden crecer mal o no crecer en este medio.
  • Los agentes antimicrobianos agregados para inhibir las bacterias también pueden inhibir ciertos hongos patógenos.
  • Se debe evitar el sobrecalentamiento de un medio con pH ácido, ya que puede volverse blando.
  • Para la identificación, los organismos deben estar en cultivo puro.
  • Se deben realizar pruebas morfológicas, bioquímicas y/o serológicas para una identificación final precisa.
  • El SDA no promueve la condensación de hongos filamentosos.

Medios de Cultivo de Hongos

Existen varias formulaciones de medios para el cultivo de hongos micangiales. A continuación, se presentan algunas de ellas:

  1. Medio de PDA (Agar dextrosa patata):
  • Ingredientes (por litro): 39 g de PDA comercial en polvo, 1 litro de agua destilada.
  • Procedimiento: Agregue el PDA en polvo al agua destilada y hierva mientras se mezcla para disolver. Autoclave durante 15 minutos a 121 °C.
  1. Medio YMEA (Extracto de levadura, extracto de malta, dextrosa, agar):
  • Ingredientes (por litro): 4 g de extracto de levadura, 10 g de extracto de malta, 4 g de dextrosa, 15 g de agar, 1 litro de agua destilada.
  • Adicionalmente, se pueden agregar 10 ml de una mezcla de estreptomicina (10,000 UI/ml) y penicilina (10,000 MCG/ml) por litro de medio.
  1. Medio MEA (Extracto de malta, agar):
  • Ingredientes (por litro): 15 g de extracto de malta, 10 g de agar, 1 litro de agua destilada.
  1. Medio PYDA (PDA con extracto de levadura):
  • Ingredientes (por litro): 15 g de PDA, 10 g de agar, 2 g de extracto de levadura, 1 litro de agua destilada.

Uso de Antibióticos en Medios de Agar

Es importante recordar que no se deben autoclavar los medios de agar con antibióticos. Los antibióticos deben agregarse cuando los medios se hayan enfriado al tacto.

Medios de Sabouraud Dextrosa

El medio de Sabouraud Dextrosa es un medio simple para probar la utilización de diversas fuentes de carbono. Tiene su propia receta y puede modificarse para aislar diferentes tipos de hongos.

Es importante tener en cuenta las recomendaciones para el uso de antibióticos en los medios de agar. No se deben autoclavar medios de agar con antibióticos, sino agregarlos cuando los medios se hayan enfriado al tacto.

Algunos antibióticos comunes utilizados son la estreptomicina, la penicilina y la cicloheximida, dependiendo de los organismos y las condiciones de cultivo. Se deben seguir las instrucciones y concentraciones adecuadas para cada antibiótico.

Es esencial mantener los medios que contienen antibióticos en condiciones oscuras y frías para evitar su degradación.

Cómo Manejar y Almacenar Medios de Cultivo

La preparación y el almacenamiento adecuados de los medios de cultivo son fundamentales para el éxito de cualquier experimento de microbiología. Este artículo proporcionará una guía detallada sobre cómo almacenar medios de cultivo, evitar la contaminación, utilizar diferentes antibióticos, seleccionar el medio de cultivo adecuado para diferentes tipos de hongos, interpretar los resultados del cultivo de hongos y las precauciones de seguridad necesarias al trabajar con medios de cultivo y antibióticos.

Almacenamiento de Medios de Cultivo

El almacenamiento adecuado de los medios de cultivo es crucial para mantener su integridad y eficacia. Los medios de cultivo preparados deben almacenarse en un lugar fresco y oscuro, preferiblemente a una temperatura de 4°C. Los medios de cultivo sólidos, como las placas de Petri, deben almacenarse boca abajo para evitar la condensación en la superficie del medio. Los medios de cultivo líquidos deben almacenarse en frascos bien cerrados para evitar la evaporación y la contaminación.

Evitando la Contaminación en los Medios de Cultivo

La contaminación es un problema común en los laboratorios de microbiología. Para evitar la contaminación, siempre trabaje en un área limpia y desinfectada. Use técnicas asépticas al manipular los medios de cultivo y los organismos. Además, siempre verifique los medios de cultivo para detectar signos de contaminación antes de usarlos.

Uso de Diferentes Antibióticos en Medios de Cultivo

Los antibióticos se utilizan en los medios de cultivo para inhibir el crecimiento de organismos no deseados. La elección del antibiótico depende del tipo de organismo que se esté cultivando. Por ejemplo, la gentamicina es efectiva contra una amplia variedad de bacterias grampositivas y gramnegativas, mientras que la tetraciclina se utiliza para inhibir el crecimiento de bacterias grampositivas.

Selección del Medio de Cultivo Adecuado para Diferentes Tipos de Hongos

La elección del medio de cultivo adecuado es crucial para el crecimiento y la identificación de los hongos. Por ejemplo, el Agar Sabouraud Dextrosa (SDA) se utiliza comúnmente para el cultivo de hongos y levaduras. Sin embargo, algunos hongos pueden requerir medios de cultivo más especializados. Por lo tanto, es importante conocer las necesidades nutricionales de los hongos que se están cultivando.

Interpretación de los Resultados del Cultivo de Hongos

La interpretación de los resultados del cultivo de hongos implica examinar el crecimiento de los hongos en los medios de cultivo y observar las características morfológicas de los hongos, como el color, la textura y el patrón de crecimiento. Estas características pueden ayudar a identificar el tipo de hongo presente.

Seguridad y Precauciones al Trabajar con Medios de Cultivo y Antibióticos

Trabajar con medios de cultivo y antibióticos requiere precauciones de seguridad. Siempre use equipo de protección personal, como guantes y batas de laboratorio, al manipular medios de cultivo y antibióticos. Evite el contacto directo con los medios de cultivo y los antibióticos, y no inhale los polvos de los medios de cultivo deshidratados o los antibióticos. En caso de contacto con la piel o los ojos, lave inmediatamente con agua abundante. Además, siempre desinfecte el área de trabajo antes y después de su uso.

Referencias:

  1. Nocera, F., Ferrara, G., Scandura, E., Ambrosio, M., Fiorito, F., & De Martino, L. (2021). A Preliminary Study on Antimicrobial Susceptibility of Staphylococcus spp. and Enterococcus spp. Grown on Mannitol Salt Agar in European Wild Boar (Sus scrofa) Hunted in Campania Region—Italy. Enlace
  2. Moya-Salazar, J., Pio-Dávila, L., Terán-Vásquez, A., & Olivo-López, J. M. (2016). Rendimiento diagnóstico del agar sangre con filtro versus agar karmali para el diagnóstico de Campylobacter en coprocultivo. Enlace
  3. Contiñas, A. (2021). Jordi Teixidor, Hemos venido a no ver. Conversaciones con Agar Contiñas. Enlace
  4. Villanueva Pedraza, E., Geisel Irigoin Cusma, P., Villanueva Guerrero, J. A., Cueva Valdivia, J., & Piñarreta Neira, W. V. (2022). Efecto de medio de cultivo Agar Geisel a partir de Moringa oleífera (Moringa) una propuesta viable en el crecimiento de Escherichia Coli. Enlace
  5. Anonymous. (1973). Evaluation of Gentamicin for Use in Virology and Tissue Culture. Enlace

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