La gentamicina
El sulfato de gentamicina es un antibiótico soluble en agua originalmente purificado del hongo Micromonospora purpurea . La gentamicina actúa uniéndose a la subunidad 30S del ribosoma bacteriano, lo que provoca la inhibición de la síntesis de proteínas y la muerte de las bacterias susceptibles. Gibco® Gentamicin es eficaz contra una amplia variedad de bacterias grampositivas y gramnegativas y se utiliza para prevenir la contaminación de cultivos celulares por bacterias. La concentración de trabajo recomendada oscila entre 0,5 y 50 µg /
.
Agar dextrosa Sabouraud (SDA) –
Sabouraud Dextrose Agar (SDA) se utiliza para el aislamiento, cultivo y mantenimiento de especies de hongos y levaduras no patógenas y patógenas . La SDA fue formulada por Sabouraud en 1892 para el cultivo de dermatofitos.
| Ingredientes | En gm / L |
| Dextrosa (glucosa) | 40 gramos |
| Peptona | 10 gramos |
| Agar | 15 gramos |
| Agua destilada | 1000 ml |
PH final 5,6 +/- 0,2 a 25ºC.
Además,
Sabouraud Dextrose Broth tiene la misma formulación que la anterior, sin agar añadido.
PH final 5,6 +/- 0,2 a 25ºC.
El agar dextrosa Sabouraud con cloranfenicol contiene 50,0 mg de cloranfenicol.
PH final 5,6 +/- 0,3 a 25ºC.
El agar dextrosa Sabouraud con cloranfenicol y gentamicina contiene 50,0 mg de cloranfenicol y 5,0 mg de gentamicina. por 1 litro de medio de cultivo
PH final de 5,6 +/- 0,3 a 25ºC.
El agar dextrosa Sabouraud con cloranfenicol y tetraciclina contiene 50,0 mg de cloranfenicol y 10,0 mg de tetraciclina.
PH final de 5,6 +/- 0,3 a 25ºC.
Sabouraud Dextrose Agar, Emmons tiene solo 20,0 g de dextrosa.
PH final de 6,9 +/- 0,2 a 25ºC.
Pueden añadirse cloranfenicol y / o tetraciclina como antimicrobianos de amplio espectro para inhibir el crecimiento de una amplia gama de bacterias gram-positivas y gram-negativas. Se agrega gentamicina para inhibir aún más el crecimiento de bacterias gramnegativas.
El pH neutro de la modificación de Emmons parece potenciar el crecimiento de algunos hongos patógenos, como los dermatofitos.
Preparación de SDA
- Combine todos los ingredientes en ~ 900 ml de agua desioinizada.
- Ajustar a pH 5,6 con ácido clorhídrico y ajustar el volumen final a 1 litro.
- Caliente a ebullición para disolver el medio por completo.
- Autoclave a 121ºC durante 15 minutos.
- Enfriar a ~ 45 a 50 ° C y verter en placas de Petri o tubos inclinados.
Las levaduras crecerán como colonias cremosas a blancas. Los mohos crecerán como colonias filamentosas de varios colores.
Morfología de colonias en SDA
Control de calidad de SDA
Aspecto
Medio deshidratado: Polvo suelto de color pajizo.
Medio preparado: Gel de color pajizo claro a pajizo.
| Controles positivos: | Resultados previstos |
| Candida albicans ATCC® 10231 | Buen crecimiento; colonias de crema |
| Aspergillus brasiliensis ATCC® 16404 | Micelio blanco; esporas negras |
| Control negativo: | |
| Medio sin inocular | Ningún cambio |
Limitaciones de SDA
- Se pueden encontrar algunas cepas que crezcan mal o no crezcan en este medio.
- Los agentes antimicrobianos añadidos a un medio para inhibir las bacterias también pueden inhibir ciertos hongos patógenos.
- Evite sobrecalentar un medio con un pH ácido, esto puede resultar en un medio blando.
- Para la identificación, los organismos deben estar en cultivo puro.
- Se deben realizar pruebas morfológicas, bioquímicas y / o serológicas para la identificación final.
- No promueve la condensación de hongos filamentosos.
Medios de cultivo de hongos
Medios nutritivos para abundantes hongos micangiales
Se pueden encontrar formulaciones de medios adicionales en la tabla de medios en la base de datos de aislamientos. Agregue nuevas formulaciones de medios a la tabla de la base de datos PDA: 39 g de medios secos PDA de BD-Difco, 1 l de agua, 10 ml de mezcla de estreptomicina (10,000 UI / ML) y penicilina (10,000 MCG / ML). Según nuestra experiencia, esto produce cultivos más ricos de hongos micangiales que otros medios. También es bastante ácido y, por lo tanto, previene el crecimiento de muchas bacterias incluso sin los antibióticos. Puede agregar 5 g de agar para medios más duros.
YMEA: (4 g de extracto de levadura, 10 g de extracto de malta, 4 g de dextrosa, 15 g de agar, 1 L de agua), 10 ml de mezcla de estreptomicina (10,000 UI / ML) y penicilina (10,000 MCG / ML) por 1L de medio. Los hongos crecen más lentamente que en PDA.
MEA: igual que YMEA, sin extracto de levadura.
PYDA: 15 g de PDA, 10 g de agar, 2 g de extracto de levadura, 1 l de agua.
MYEA: 15 g de MEA, 10 g de agar, 2 g de extracto de levadura, 1 l de agua.
Antibióticos
¡NO AUTOCLAVE MEDIOS DE AGAR CON ANTIBIÓTICOS! Agréguelo cuando los medios se hayan enfriado al tacto.
Estreptomicina / Penicilina: catálogo # 516106, suministrado en polvo. Mezclar en un medio líquido a una concentración de 100-200 ppm. Para PDA, 100 mg / L equivalen a 100 ppm.
Agregue cicloheximida para Ophiostomatales, incluida Raffaelea (pero no Ambrosiella). Kolarik y Hulcr (2008) utilizaron cicloheximida 0,1 mg / L para seleccionar hongos micangiales ofiostomatoides, la gente usa entre 0,1-0,5mb / L. Estamos usando cicloheximida 0,5 mg / L en el medio.
El crecimiento excesivo de levadura (a menudo en YMEA) se puede prevenir colocando un trozo de agar encima del inóculo.
Todos los medios que contienen antibióticos deben mantenerse a oscuras y a temperatura fría para evitar su degradación.
Medios de Sabouraud Dextrosa
Medio simple para probar la utilización de diversas fuentes de carbono.
INGREDIENTES
MONTO
Dextrosa:
40,0 g / lit.
Agar:
15,0 g / lit.
Digerido pancreático de caseína:
5,0 g / litro.
Digerido péptico de tejido animal:
5,0 g / litro. (o 5 gramos más de caseína)
Diana Six añadió 10 g de extracto de levadura para aislar Ambrosiella beaveri.
Medio mínimo para Aspergillus, por litro
Barratt y col., 1965 Genetics 52: 233-246
SALES
MONTO
NaNO3
6,0 g
KC1
0,52 gramos
MgSO4. 7H20
0,52 gramos
KH2PO4
1,52 gramos
Ajuste el pH a aproximadamente 6,5 (generalmente requiere 1 ml de NaOH 1 N). Puede preparar una solución madre 2OX de las sales anteriores.
OTROS INGREDIENTES
MONTO
glucosa (dextrosa)
10,0 g
Oligoelementos de Hutner
2 ml
añadir Difco Agar
15,0 g
Fungal Culture Media
Otra Receta
Preparación de medio comercial en polvo
Agregue 39 g de PDA comercial en polvo a 1 litro de agua destilada.
Hervir mientras se mezcla para disolver.
Autoclave 15 min a 121 ° C.
Además, el agar dextrosa de patata con clortetraciclina contiene:
Clortetraciclina
40,0 mg
Además, el agar dextrosa de patata con cloranfenicol contiene:
Cloranfenicol
25,0 mg
PH final de 5.6 +/- 0.2 a 25 grados C.
Además, el agar dextrosa de patata con TA contiene:
Ácido tartárico
1,4 gramos
PH final de 3,5 +/- 0,3 a 25 grados C.
la gentamicina se mantuvo estable en pH 2 a 10 durante 15 días a 37 C en medio de cultivo de tejidos, y su actividad no se vio afectada por la presencia de suero. Además, era estable al autoclave.
Estudio completo de Evaluation of Gentamicin for Use in Virology and Tissue Culture en:
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