· Felipe Vengoechea · trabajo-de-laboratorio
Antibi¡tico con Agar: Preparación y Uso en Medios de Cultivo
La gentamicina es un antibi¡tico soluble en agua originalmente purificado del hongo Micromonospora purpurea. Actía unióndose a la subunidad 30S del ribosoma bacteriano, lo que provoca la inhibición de la síntesis de prote¡nas y la muerte de las bacterias susceptibles. Gibco¡ Gentamicin es eficaz contra una amplia variedad de bacterias grampositivas y gramnegativas, y se utiliza para prevenir la contaminación de cultivos celulares por bacterias. La concentración de trabajo recomendada oscila entre 0,5 y 50 ¡g/ml.
La Gentamicina es el único antibi¡tico que resiste el proceso de esterilización, es por eso que para el cultivo de hongos es la mejor opción.
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Receta de Agar Dextrosa Sabouraud (SDA)
El Agar dextrosa Sabouraud (SDA) se utiliza para el aislamiento, cultivo y mantenimiento de especies de hongos y levaduras no pat¡genas y pat¡genas.
Sabouraud Dextrose Agar (SDA) fue formulado por Sabouraud en 1892 para el cultivo de dermatofitos.
- Dextrosa (glucosa): 40 gramos
- Peptona: 10 gramos
- Agar: 15 gramos
- Agua destilada: 1000 ml
El pH final es de 5,6 +/- 0,2 a 25¿Có.
Variantes de Agar Dextrosa Sabouraud (SDA)
Existen varias variantes del Agar Dextrosa Sabouraud (SDA) que contienen diferentes antibi¡ticos y tienen diferentes niveles de pH. Algunas de estas variantes incluyen:
- Agar dextrosa Sabouraud con cloranfenicol
- Agar dextrosa Sabouraud con cloranfenicol y gentamicina
- Agar dextrosa Sabouraud con cloranfenicol y tetraciclina
- Sabouraud Dextrose Agar, Emmons
Estos medios pueden contener cloranfenicol, tetraciclina y gentamicina como antimicrobianos para inhibir el crecimiento de bacterias grampositivas y gramnegativas. La adición de gentamicina también ayuda a inhibir el crecimiento de bacterias gramnegativas.
La modificación de Emmons con pH neutro parece favorecer el crecimiento de algunos hongos pat¡genos, como los dermatofitos.
Preparación de SDA
Para preparar el SDA, siga estos pasos:
- Combine todos los ingredientes en ~ 900 ml de agua desionizada.
- Ajustar a pH 5,6 con Ácido clorh¿Drico y ajustar el volumen final a 1 litro.
- Caliente a ebullición para disolver el medio por completo.
- Autoclave a 121¿Có durante 15 minutos.
- Enfriar a ~ 45 a 50 ¡ C y verter en placas de Petri o tubos inclinados.
Morfología de colonias en SDA:
El agar dextrosa Sabouraud sin inocular tendr¡ un aspecto de polvo suelto de color pajizo en su forma deshidratada y un gel de color pajizo claro a pajizo en su forma preparada. Los controles positivos como Candida albicans ATCC¡ 10231 mostrar¡n un buen crecimiento con colonias de color crema, mientras que Aspergillus brasiliensis ATCC¡ 16404 mostrar¡ micelio blanco y esporas negras. El control negativo, sin inocular, no mostrar¡ ningún cambio.
Limitaciones de SDA:
- Algunas cepas pueden crecer mal o no crecer en este medio.
- Los agentes antimicrobianos agregados para inhibir las bacterias también pueden inhibir ciertos hongos pat¡genos.
- Se debe evitar el sobrecalentamiento de un medio con pH Ácido, ya que puede volverse blando.
- Para la identificación, los organismos deben estar en cultivo puro.
- Se deben realizar pruebas morfol¡gicas, bioquímicas y/o serol¡gicas para una identificación final precisa.
- El SDA no promueve la condensación de hongos filamentosos.
Medios de Cultivo de Hongos
Existen varias formulaciones de medios para el cultivo de hongos micangiales. A continuación, se presentan algunas de ellas:
- Medio de PDA (Agar dextrosa patata):
- Ingredientes (por litro): 39 g de PDA comercial en polvo, 1 litro de agua destilada.
- Procedimiento: Agregue el PDA en polvo al agua destilada y hierva mientras se mezcla para disolver. Autoclave durante 15 minutos a 121 ¿Có.
- Medio YMEA (Extracto de levadura, extracto de malta, dextrosa, agar):
- Ingredientes (por litro): 4 g de extracto de levadura, 10 g de extracto de malta, 4 g de dextrosa, 15 g de agar, 1 litro de agua destilada.
- Adicionalmente, se pueden agregar 10 ml de una mezcla de estreptomicina (10,000 UI/ml) y penicilina (10,000 MCG/ml) por litro de medio.
- Medio MEA (Extracto de malta, agar):
- Ingredientes (por litro): 15 g de extracto de malta, 10 g de agar, 1 litro de agua destilada.
- Medio PYDA (PDA con extracto de levadura):
- Ingredientes (por litro): 15 g de PDA, 10 g de agar, 2 g de extracto de levadura, 1 litro de agua destilada.
Uso de Antibi¡ticos en Medios de Agar
Es importante recordar que no se deben autoclavar los medios de agar con antibi¡ticos. Los antibi¡ticos deben agregarse cuando los medios se hayan enfriado al tacto.
Medios de Sabouraud Dextrosa
El medio de Sabouraud Dextrosa es un medio simple para probar la utilización de diversas fuentes de carbono. Tiene su propia receta y puede modificarse para aislar diferentes tipos de hongos.
Es importante tener en cuenta las recomendaciones para el uso de antibi¡ticos en los medios de agar. No se deben autoclavar medios de agar con antibi¡ticos, sino agregarlos cuando los medios se hayan enfriado al tacto.
Algunos antibi¡ticos comunes utilizados son la estreptomicina, la penicilina y la cicloheximida, dependiendo de los organismos y las condiciones de cultivo. Se deben seguir las instrucciones y concentraciones adecuadas para cada antibi¡tico.
Es esencial mantener los medios que contienen antibi¡ticos en condiciones oscuras y fr¡as para evitar su degradación.
C¡mo Manejar y Almacenar Medios de Cultivo
La preparación y el almacenamiento adecuados de los medios de cultivo son fundamentales para el Éxito de cualquier experimento de microbiología. Este artículo proporcionar¡ una guía detallada sobre c¡mo almacenar medios de cultivo, evitar la contaminación, utilizar diferentes antibi¡ticos, seleccionar el medio de cultivo adecuado para diferentes tipos de hongos, interpretar los resultados del cultivo de hongos y las precauciones de seguridad necesarias al trabajar con medios de cultivo y antibi¡ticos.
Almacenamiento de Medios de Cultivo
El almacenamiento adecuado de los medios de cultivo es crucial para mantener su integridad y eficacia. Los medios de cultivo preparados deben almacenarse en un lugar fresco y oscuro, preferiblemente a una temperatura de 4¿Có. Los medios de cultivo sílidos, como las placas de Petri, deben almacenarse boca abajo para evitar la condensación en la superficie del medio. Los medios de cultivo líquidos deben almacenarse en frascos bien cerrados para evitar la evaporación y la contaminación.
Evitando la Contaminación en los Medios de Cultivo
La contaminación es un problema común en los laboratorios de microbiología. Para evitar la contaminación, siempre trabaje en un área limpia y desinfectada. Use técnicas asípticas al manipular los medios de cultivo y los organismos. Además, siempre verifique los medios de cultivo para detectar signos de contaminación antes de usarlos.
Uso de Diferentes Antibi¡ticos en Medios de Cultivo
Los antibi¡ticos se utilizan en los medios de cultivo para inhibir el crecimiento de organismos no deseados. La elección del antibi¡tico depende del tipo de organismo que se está cultivando. Por ejemplo, la gentamicina es efectiva contra una amplia variedad de bacterias grampositivas y gramnegativas, mientras que la tetraciclina se utiliza para inhibir el crecimiento de bacterias grampositivas.
Selección del Medio de Cultivo Adecuado para Diferentes Tipos de Hongos
La elección del medio de cultivo adecuado es crucial para el crecimiento y la identificación de los hongos. Por ejemplo, el Agar Sabouraud Dextrosa (SDA) se utiliza comúnmente para el cultivo de hongos y levaduras. Sin embargo, algunos hongos pueden requerir medios de cultivo más especializados. Por lo tanto, es importante conocer las necesidades nutricionales de los hongos que se están cultivando.
Interpretación de los Resultados del Cultivo de Hongos
La interpretación de los resultados del cultivo de hongos implica examinar el crecimiento de los hongos en los medios de cultivo y observar las características morfol¡gicas de los hongos, como el color, la textura y el patr¡n de crecimiento. Estas características pueden ayudar a identificar el tipo de hongo presente.
Seguridad y Precauciones al Trabajar con Medios de Cultivo y Antibi¡ticos
Trabajar con medios de cultivo y antibi¡ticos requiere precauciones de seguridad. Siempre use equipo de protección personal, como guantes y batas de laboratorio, al manipular medios de cultivo y antibi¡ticos. Evite el contacto directo con los medios de cultivo y los antibi¡ticos, y no inhale los polvos de los medios de cultivo deshidratados o los antibi¡ticos. En caso de contacto con la piel o los ojos, lave inmediatamente con agua abundante. Además, siempre desinfecte el área de trabajo antes y después de su uso.
Referencias:
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